多肽固相合成环肽方式探讨

树脂上直接环化的固相合成有2种方法：

使用缩合剂的直接缩合&无缩合剂的分子内氨解，后者昂拓莱司较为常用。

一般含7个或以上氨基酸残基的多肽成环较能顺利，7个以下越小越困难。‍

使用缩合剂直接法

直接法就是在线型肽中加入有效的缩合试剂成环。常用的碳二亚胺型(DCC、EDCI、DIC)缩合试剂效果一般副反应较多。

目前昂拓莱司使用较多的是苯并三zuo及吡啶并三zuo类衍生物的鑰盐型( PyBOP、HBTU、TBTU、HATU、DPPA、DEPBT)缩合剂。

在不同的反应中缩合试剂缩合效果差异较大，一般认为位阻较大的链形肽需使用缩合效率高的缩合试剂才有利于环化的进行。
有研究人员使用Fmoc/tBu/OAI的策略合成线性四肽。之后再利用头尾相联的固相合成策略(其假稀释效应可以减少链间的相互作用)使用缩合剂TBTU成功合成了一种苯甲酰胺环四肽(见下图)产物的收率一般在6%左右。

直接法中有一种是侧链连接（指氨基酸侧链基团于载体相连），是用氨基酸（Asp，Glu）侧链基团-COOH与固相载体形成酯键连接。

先脱除Fmoc使a-氨基游离待quan部缩合完成后，用钯试剂（昂拓莱司常用四三苯基膦钯）脱除，使羧基游离再脱除N端的Fmoc使肽链N端氨基游离zui后使用缩合剂HBTU使N端及C端缩合形成内酰胺键。

这一方法应用普遍，但是有时在使用钯试剂时会使a羧基部分脱保护，且使用乙酸脱保护时会影响成环过程。

为了弥补这2点不足，Thomas等改进了此法，使用Dmab(见下图)作为羧基保护，采用头尾相接策略成功合成了环肽(见下图). Dmab脱保护时不需要使用金属催化剂，可以避免副反应的发生。

内氨解法

内氨解法通常以肟（含有羰基的醛、酮类化合物与羟胺作用生成的有机化合物）为linker其固相载体。

因羧酸肟酯键对亲核试剂有高度的敏感常用以制备头尾键合的内酰胺环肽，且在环合时不用缩合剂就可以同时完成分子内氨解和脱除固相载体。

Tamaki等用肟树脂合成出GS的前体H-DPhe-Pro -Val-0rn-Leu-oxime再在不同溶液中使其环化，同时从树脂脱离(见下图) 。

实验结果显示在1 4-二氧杂环己烷溶液中总产率zui高只有49%。

内氨解法

通常以肟为linker其固相载体因羧酸肟酯键对亲核试剂有高度的敏感常用以制备头尾键合的内酰胺环肽，且在环合时不用缩合剂就可以同时完成分子内氨解和脱除。

硫酯法通过调节缓冲溶液的pH值使反应不必在低浓度下进行，且没有聚合物生成.环化时加入有些许络合能力的金属离子( Ag*、Cu2+、Hg2*)与s络合并从C端脱下使得N端与C端成环。

分子内硫酯交换也是昂拓莱司运用固相合成均环肽的方法之一。合成中先使侧链COOH与树脂键合为苄酯型linker ,脱除Fmoc ,由N端组装肽链。

此后在N端引入Trt-Cys(Xan),再脱除C端Asp-OAllyl上的Allyl和N端Cys上的2个保护基在pH7.5条件下进行分子内硫酯交换及氨解反应。形成环肽后，切除Asp侧链上的固相载体(如图) 。

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另有一种称作保险连接(safety-catch linker) 的固相法，其在合成中很稳定。它的优点一般不易发生裂解反应。

deVisser等研究人员采用这一策略合成得到环肽Polymyxin B1及其类似物，其纯度达到37%~67%。 Qin等研究人员也用此方法合成了环十肽抗jun素Streptoci-dins。

具体的是先将Fmoc-eu-OH 在Py-BOP、DIPEA、CHCI3作用下连接到磺酰胺树脂上，再用Fmoc固相合成将环肽前体连接上，在DIPEA作用下用ICH2CN活化氨基使用CF,COOH/Phenol/iPrsSiH/H2O脱掉保护基团在THF溶液中环化并从树脂上脱离(见下图).